Partindo de Ouro Verde de Goiás, cidade situada a cerca de 40 quilômetros ao norte de Anápolis, esse trecho atravessará boa parte do sudeste goiano, uma das principais regiões do agronegócio no país, e chegará a Estrela d´Oeste/SP, completando 684 km de extensão.
A economia da região é bastante desenvolvida e dinâmica. Na agricultura destaca-se o cultivo e beneficiamento da soja, sorgo, açúcar e milho; na pecuária, a produção de carnes (bovinos, suínos e aves) e laticínios e na indústria, há predomínio do setor farmacêutico.
Em Estrela d’Oeste, a FNS se conectará com a Ferrovia EF - 364, operada pela Rumo S.A, de modo a permitir acesso ao Porto de Santos e ao polo econômico e industrial de São Paulo.
Em 31 de julho de 2019, o Governo Federal assinou com a Rumo S.A. o contrato de subconcessão do trecho da Ferrovia Norte-Sul (FNS) entre Porto Nacional/TO e Estrela d’Oeste/SP. A Rumo S.A venceu o leilão realizado em março com valor proposto de R$ 2,7 bilhões, o que representa um ágio de 100,92% sobre o lance mínimo. A subconcessão prevê investimentos de R$ 2,8 bilhões e prazo de 30 anos.